Fombuena Rubio B1, Pizarro Moreno Á1, Gil Gomez A1, Garzón Benavides M1, Peña Chilet M2, Giraldez M1, Perez Gutierrez A2, Espin Jaime B3, Sobrino S4, García Fernandez FJ4, Argüelles F1, Rico Gutierrez MC1, Pastor Ramirez H1, Millan Dominguez R1, Ruiz Carnicer A5, Sousa Martín C5, Dopazo J2, Romero Gomez M1
1UGC Aparato Digestivo. Hospitales Universitarios Virgen Macarena - Virgen del Rocío, Sevilla. 2Unidad Matemática aplicada y estadística. Hospitales Universitarios Virgen Macarena - Virgen del Rocío, Sevilla. 3UGC Gastroenterología Pediátrica. Hospitales Universitarios Virgen Macarena - Virgen del Rocío, Sevilla. 4UGC Endoscopia. Hospitales Universitarios Virgen Macarena - Virgen del Rocío, Sevilla. 5Departamento Microbiología. Universidad de Sevilla, Sevilla.
Determinar los cambios en la expresión epigenética de pacientes con enfermedad celíaca tratados con dieta sin gluten (DSG).
Se realizó análisis de expresión de microARNs en plasma de pacientes diagnosticados de enfermedad celíaca con alteraciones histológicas Marsh 3 (a-c)(n=10), seguidos durante un año de DSG, en el momento basal y a los 12 meses. La adherencia a la DSG se evaluó mediante el cuestionario CDAT. La respuesta se determinó mediante demostración de mejoría histológica a los 12 meses a Marsh 0-1. En 5 pacientes demostramos mejoría (respondedores) (n=5; Marsh 0-1 a 12 meses) y en otros 5 pacientes no encontramos cambios histológicos remarcables (n=5; Marsh 3 a-c a 12 meses). Se realizó cribado de microARNs mediante microarrays miRNA 4.0 de Affymetrix (ThermoFisher, CA, EEUU). Se aisló el ARN total partiendo de 200 uL de las muestras de plasma utilizado el kit comercial miRNAeasy serum/plasma (Qiagen) en el robot automatizado Qiacube (Qiagen). La calidad de la extracción se evaluó mediante Bioanalyzer (Agilent RNA 6000 Nano), teniendo en cuenta el RIN como parámetro de la integridad del ARN. Finalmente, el ARN conteniendo los miRNAs se hibridó en los microarrays y, tras lectura en la plataforma GeneChip Scanner, los datos fueron analizados en el Área de Bioinformática Clínica del Hospital Universitario Virgen del Rocío tras los controles de calidad y la normalización de los datos se realizó un análisis de la expresión diferencial (ED) de los microARNs obtenidos (p-valor <0,05).
Los pacientes presentaron una edad de 44,1+/-16,1 años, con predominancia de sexo femenino (80,0%). A nivel basal, los respondedores no mostraron diferencias respecto de los no respondedores. Además, no observamos diferencias en el cumplimiento de la dieta según CDAT entre los grupos p=0,727. Respecto de los miRNAs, se seleccionaron los 338 miRNAs humanos que presentaron un mayor nivel de dispersión en los niveles de expresión de las diferentes muestras. De ellos, no observamos diferencias significativas al comparar pacientes respondedores vs no respondedores al diagnóstico. Además, tampoco observamos diferencias entre estos grupos respecto del tiempo (0meses vs 12meses). Los pacientes respondedores mostraban 5 miRNAs sobre-expresados diferencialmente respecto a los no respondedores en mes 12 de DSG [miR-107(logFC=2,684 y P.val ajustado=0,004), miR-191-5p (logFC=3,203 y P.val ajustado=0,036), miR-103a-3p (logFC=2,339 y P.val ajustado=0,036), miR-584-5p (logFC=1,730 y P.val ajustado=0,036) y miR-106a-5p (logFC=2,344 y P.val ajustado=0,036)].
Los miRNAs miR-107, miR-191-5p, miR-103a-3p, miR-584-5p y miR-106a-5p se muestran diferencialmente expresados a nivel circulante en pacientes con enfermedad celíaca que responden histológicamente a la dieta sin gluten. Por tanto, podrían aplicarse en práctica clínica como potenciales biomarcadores de respuesta.
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